亲和层析法可将抗原和抗体、酶和酶抑制物、酶蛋白和辅酶、激素和受体、DNA和RNA等之间有特殊亲和力的生物分子紧密结合成复合物，如将复合物的一方固定于固相载体上，则可从溶液中分离和提纯另一方。抗原或抗体与支持物结合方法很多，可归纳为载体结合法、物理吸附法、交联法、网络法。

1.凝胶过滤法可通过凝胶分子筛的作用，将大、中、小3类分子分开。 2.离子交换层析是利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素，吸附带有相反电荷的蛋白质抗原。

白喉棒状杆菌致病物质主要为外毒素蛋白，具有强烈的毒性和免疫原性，应及时注射白喉抗毒素（抗血清的中和反应）及抗生素。

可溶性抗原的纯化方法有超速离心法(分为差速离心法和密度梯度离心法)、选择性沉淀法、凝胶过滤法(又称分子筛层析)、离子交换层析法、亲和层析法。

木瓜蛋白酶水解片段：2个相同的Fab段即抗原结合片段和1个Fc段，Ig同种型的抗原性主要存在于Fc段。胃蛋白酶水解IgG片段：获得一个F（ab’）2片段，该片段为双价，与抗原结合可发生凝集反应和沉淀反应。Ig的Fe段被胃蛋白酶裂解为若干小分子片段，被称为pFc’，失去生物学活性。胃蛋白酶水解IgG后的F（ab’）2片段，既保存了结合抗原的生物学活性，又避免了Fc段抗原性可能引起的不良反应。胰蛋白酶为非特异性裂解。限制性核酸内切酶和β-内酰胺酶不能裂解蛋白质。

木瓜蛋白酶水解片段：2个相同的Fab段即抗原结合片段和1个Fc段，Ig同种型的抗原性主要存在于Fc段。胃蛋白酶水解IgG片段：获得一个F（ab’）2片段，该片段为双价，与抗原结合可发生凝集反应和沉淀反应。Ig的Fe段被胃蛋白酶裂解为若干小分子片段，被称为pFc’，失去生物学活性。胃蛋白酶水解IgG后的F（ab’）2片段，既保存了结合抗原的生物学活性，又避免了Fc段抗原性可能引起的不良反应。胰蛋白酶为非特异性裂解。限制性核酸内切酶和β-内酰胺酶不能裂解蛋白质。

1.用0.3%～0.5%甲醛处理制备鞭毛抗原。 2.用100℃加温2～2.5小时去除菌体鞭毛抗原。 3.制备毒素抗原在灭菌后再加入0.5%～1.0%氯化钙溶液。 4.制备组织细胞可溶性抗原时可用-20℃反复冻融法。

在免疫原很宝贵时先用不完全佐剂做基础免疫(预免疫)，10～15天后可见肘窝处有肿大的淋巴结(有时在腹股沟处触及)，用两手指固定好淋巴结，消毒后用微量注射器直接注射入抗原(一般不需要佐剂)。

五种免疫球蛋白都具抗原性，皆可提取及纯化，但如分解成片段作为免疫原可制备出分辨力更高的特异性抗血清。制备方法有：非共价键解离法、温共价键解离法、溴化氰裂解法、酶解法。

细胞抗原分膜蛋白抗原、细胞质抗原(主要为细胞器)、细胞核与核膜抗原，制备这些抗原前需将细胞破碎，方法有：反复冻融法、超声破碎法、自溶法、酶处理法、表面活性剂处理法。