免疫固定电泳是一项具有实用价值的电泳加沉淀反应技术,可用于各种蛋白质的鉴定。其原理为将待检样本在凝胶板上做区带电泳,将蛋白质分离成不同区带,在其上覆盖抗血清,抗血清可与某区带的单克隆免疫球蛋白相结合形成沉淀,通过漂洗和染色并对照蛋白质参考泳道,对各类免疫球蛋白及其轻链进行分型。
单向扩散试验检测时的注意点:抗血清必须特异性强、效价高、亲和力强、在良好的条件下保存;每次测定都必须做标准曲线;每次测定时必须用质控血清做质控;注意双环现象(出现了两种抗原性相同成分);应用单克隆抗体测量多态性抗原时测定值偏低,用多克隆抗体测量单克隆病时结果偏高。
制备亲和层析柱选择琼脂糖珠4B;聚乙二醇是增浊剂;琼脂糖是双向免疫扩散试验中常用的支持物;常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行抗体纯度的鉴定。
制备亲和层析柱选择琼脂糖珠4B;聚乙二醇是增浊剂;琼脂糖是双向免疫扩散试验中常用的支持物;常用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行抗体纯度的鉴定。
对流免疫电泳实质上是将双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术。在pH8.6的缓冲液中,大部分蛋白质抗原成分常带较强的负电荷,在电场中向正极移动;而作为抗体的IgG,等电点偏高(pH6~7),在pH8.6时带负电荷较少,再加上分子量较大,移动速度慢,所以它本身向正极移动缓慢甚至不移动,这样它就会在凝胶的电渗作用下,随水流向负极,电渗引向负极移动的液流速度超过了IgG向正极的移动速度,因此抗体移向负极,在抗原抗体最适比处形成沉淀线,从沉淀相对于两孔的位置还可以大致判断抗原抗体的比例关系。
抗原抗体反应液的最适pH为6.5~8.5,超过此限度则不易形成IC,甚至可引起IC解离。在一定范围内,离子强度大,IC形成快,离子的种类也可影响IC的形成。因此,一般常用磷酸盐缓冲液作为免疫比浊法的反应液。
对流免疫电泳是将双向扩散试验与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术;火箭免疫电泳是将单向扩散实验与电泳相结合的一项定量检测技术;免疫电泳是将区带电泳与免疫双扩散相结合的一种免疫分析技术;免疫固定电泳是一项具有实用价值的电泳加沉淀反应技术,可用于各种蛋白质的鉴定;交叉免疫电泳是将区带电泳和火箭电泳相结合的免疫电泳分析技术。
平板法单向琼脂放散试验是将抗体加入到琼脂糖内制板。
免疫电泳为定性试验,目前主要应用于纯化抗原和抗体成分的分析及正常和异常免疫球蛋白的识别与鉴定方面,例如多发性骨髓瘤患者血清在免疫电泳后,可观察到异常的M蛋白沉淀弧。
对流免疫电泳实质上是将双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术。