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四膜虫(Tetrahymena)是一种有两个胞核的有纤毛原生动物,小胞核(micronucleus)具有细胞染色体的主拷贝,其参与有性接合,但不参与日常基因的表达。大胞核(macronucleus)是一种由很多大小基因双链DN段形成的细胞基因组的“工作”拷贝(小染色体-minichromosomes),其参与基因转录,小染色体的许多拷贝中都有核糖体RNA的基因。可用梯度离心将其与其他小染色体分离,以进行进一步的研究。
通过电镜检测发现每个含核糖体基因小染色体为线性结构,长21kb。用琼脂糖凝胶电泳观察其仍为21kb(图16-3-24,泳道1)。如果用限制酶BglⅡ酶切小染色体,产生的两个片段13.4和3.8kb加起来不到21kb(图16-3-24,泳道2)。用其他限制酶酶切DNA,所得片段大小加起来仍旧不足21kb,而且每一种消化所产生的片段大小之和均不同。
如果未切割的小染色体在跑电泳之前先经过变性退火,那么21kb片段将被切割成正好是其一半的10.5kb。用双链片段代替(图16-3-24,泳道3),相似地,如果BglⅡ切割过的小染色体经变性和退火,则13.4kb片段将被其一半大小的6.7kb双链片段代替(图16-3-24,泳道4)。
请解释为什么限制酶切割下的片段加起来不是21kb?为什么经变性退火后其电泳形式就发生改变?你认为核糖体小染色体的序列是什么样的?
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