免疫标记分析技术主要包括:放射物标记、酶标记、发光标记、荧光标记和金标记方法。 放射物标记分析:用放射物标记抗原或抗体发展的放射免疫分析是美国科学 Yalow 和 Berson 于 1959 年创立的一种微量分析法,它是将具有高灵敏度的放射性核素示踪技术和特异性免疫化学技术相结合而建立的新方法。该技术利用核素标记物的放大效应,改善了待测物的检测下限,同时以抗体或抗原作为结合试剂,大大提高了检测方法的特异性。 荧光标记分析:以荧光标记的荧光免疫分析是由 Conn 等首创于 20 世纪 40 年代的一种标记免疫学技术,其所用标记物是荧光素和荧光染料,是将抗原或抗体标记以荧光物质与相应抗原或抗体结合,在荧光显微镜或紫外线照射下,检测荧光强度和荧光现象的一种检测方法。荧光标记免疫法灵敏度高,但荧光素常会产生生物学毒性,导致抗体或抗原的灵敏度和选择性下降。 酶标记分析技术:是继免疫荧光抗体技术和放射免疫分析之后发展起来的一大新型的血清学技术。 1966 年, Nakane 等和 Avrameas 等分别报道用酶代替荧光素标记抗体,建立了酶标抗体技术,用于生物组织中抗原的定位和鉴定。 1971 年, Engvall Van Weemen 等报道了酶联免疫吸附试验,从而建立了酶标抗体的定量检测技术。 20 世纪 80 年代,基于酶标记抗体检测和鉴定蛋白质分子的免疫转印技术问世。目前,免疫酶标记技术已成为免疫诊断、检测和分子生物学研究中应用最广泛的免疫学方法之一。 发光标记分析: 20 世纪 80 年代末,国外开始用化学发光试剂来标记抗原或抗体,从而建立了发光免疫分析技术。狭义的发光免疫分析主要是指化学发光免疫分析。另外,还有酶放大化学发光免疫分析和电化学发光免疫分析。 CLIA 是 Sohrocler 和 Halman 在 20 世纪 70 年代末期建立的,该方法兼有发光分析的高灵敏度和免疫反应的特异性。其基本原理同酶标记分析法,是用化学发光反应的试剂 ( 可以是发光剂或催化剂等 ) 标记抗原或抗体,标记后的抗原和抗体与待测物经过一系列的免疫反应和理化步骤 ( 如离心分离、洗涤等 ) ,最后以测定发光强度形式测定。