三、化学灭菌法 化学灭菌法是使用化学药品直接作用于微生物而将其杀死同时不应损害药品的质量,达到灭菌目的的方法。化学药品因品种、用量不同,有些可用于灭菌,有些只能用于抑菌。化学药品灭菌或抑菌的机理也因品种不同而异:有的使病原体蛋白质变性,发生沉淀;有的与细菌的酶系统结合,影响其代谢功能;有的降低细菌的表面张力,增加菌体胞浆膜的通透性,使细胞破裂或溶解。 理想的化学灭菌剂应具备下列条件: 1杀菌谱广;2有效杀菌浓度低;3作用速度快;4毒性低,对药品无腐蚀性,不易燃易爆;5性质稳定,不易受有机物、酸、碱及其他物理、化学因素的影响;6易溶于水,可在低温下使用;无色、无味、无臭,灭菌后易于从被灭菌物品上除去,无残留;8价格低廉,来源丰富,便于运输。 化学灭菌法一般包括气体灭菌法和表面消毒法。 (一)气体灭菌法 气体灭菌法是利用化学药品所形成的气体或蒸汽对灭菌的物品、材料进行熏蒸,而达到灭菌目的的方法。药物制剂生产时,需灭菌处理的固体药物或辅料耐热性差,既不能加热灭菌,又不能滤过除菌时,常采用气体灭菌法进行灭菌。选用气体灭菌剂应当考虑除了符合一般化学灭菌剂的要求外,还应注意其形成气体或蒸汽的温度。 1.环氧乙烷灭菌法 制药工业上常用环氧乙烷作为灭菌的气体。环氧乙烷的分子式为( CH 2 ) 2 O,沸点是10.9°C,室温下为无色气体。环氧乙烷穿透力较强,易穿透塑料、纸板及固体粉末等物质,并易从这些物质中消散。环氧乙烷的杀菌力强,既可杀死微生物的繁殖体,对细菌芽孢、真菌和病毒等均具有杀灭作用。该气体对大多数固体物质呈惰性,因此可用于塑料容器、对热敏感的固体药物、纸或塑料包装的药物、塑料制品、橡胶制品、衣物、敷料及器械的灭菌。 环氧乙烷具有可燃性,与空气混合时,当空气的含量达 3.0%(v/v ) 即可爆炸,故应用时需用二氧化碳稀释:常用的混合气体是 10%环氧乙烷,90%二氧化碳。 环氧乙烷对神经系统有麻醉作用,人与大剂量的环氧乙烷接触,可发生极性中毒;并能损害皮肤及眼黏膜,产生水泡或结膜炎,应用时须注意防护。 环氧乙烷灭菌时,先将待灭菌物品置于灭菌器内,密闭减压排除空气,预热,在减压条件下输入环氧乙烷混合气体,保持一定浓度、温度和湿度,经一定时间后,抽真空排除环氧乙烷混合气体,然后送入无菌空气,直至将残余气体完全驱除。操作时控制的灭菌条件为:环氧乙烷浓度为 850~900mg/L(3h,45°C)或450mg/L(5h ,45°C),相对湿度60%±10%,温度54°C±10°C。 2.甲醛蒸汽熏蒸灭菌法 甲醛是杀菌力很强的广谱杀菌剂。甲醛蒸汽与环氧乙烷相比,杀菌力更强,杀菌谱更广,但由于穿透力差,所以只能用于空气杀菌。应用甲醛溶液加热熏蒸灭菌时,一般采用气体发生装置,每立方米空间用 40%甲醛溶液30ml,加热产生甲醛蒸汽,室内相对湿度以75%为宜,密闭熏蒸12~24h,残余蒸汽用氨气吸收(氨醛缩合反应),或通入经处理的无菌空气排除。 3.其它蒸汽熏蒸灭菌法 加热熏蒸法还可用丙二醇( 1ml/m 3 );乳酸( 2ml/m 3 )。丙二醇和乳酸的杀菌力不如甲醛,但对人体无害。此外, β-丙内酯、过氧醋酸、戊二醛、三甘醇也可以蒸汽熏蒸的形式用于室内灭菌。 (二)表面消毒法 消毒是杀死物体上病原微生物的方法。本法是用化学药品作为消毒剂,配成有效浓度的液体,用喷雾、涂抹或浸泡的方式到达消毒的目的。 多数化学消毒剂仅对细菌繁殖体有效,而不能杀死芽孢,应用消毒剂的目的在于减少微生物的数量。具体应用时应根据药物作用特点及消毒对象选择药物。 目前常用的消毒剂有以下几类。 1.醇类 包括乙醇、异丙醇、氯丙醇等,能使菌体蛋白变性,但杀菌力较弱,能杀灭细菌繁殖体,但不能杀死芽孢。常用于皮肤和物体表面的消毒。 2.酚类 包括苯酚、甲酚、甲酚皂溶液、氯甲酚等。苯酚又名石炭酸, 3%~5%的苯酚溶液用于手术器械和房屋的消毒;甲酚又名煤酚,抗菌作用较苯酚强三倍,腐蚀性及毒性均较小;煤酚皂溶液(来苏儿)是由甲酚500ml、植物油300g和氢氧化铝43g配成的皂液,是常用的消毒剂,可用于皮肤、橡胶手套、器械、金属、地面、门窗、墙壁、空气、环境等的消毒。但来苏儿有甲酚臭味,因此不能用作食具及厨房的消毒。 3.表面活性剂 包括洁尔灭(苯扎氯铵)、新洁尔灭(苯扎溴铵)、度米芬、洗必泰(氯已定)等阳离子表面活性剂。本类消毒剂抗菌谱广,作用快而强。常用于皮肤、器械和内外环境表面的消毒。 4.氧化剂 包括过氧醋酸、过氧化氢、臭氧、高锰酸钾等。本类消毒剂 具有很强的氧化能力,杀菌作用较强。 常用于塑料、玻璃、人造纤维等器具的浸泡消毒。 5.含氯消毒剂 包括漂白粉、洗消净、氯胺等。漂白粉为含有效氯 25%~35%的灰白粉末,受潮易分解失效,应临用时配制。本品杀菌谱广,杀菌力强,但对皮肤有刺激性,对金属有腐蚀性,故常用于非金属用具和无色衣物的消毒。洗消净是由次氯酸钠溶液(含氯量不得低于5%)和40%十二烷基磺酸钠溶液等量混合配制而成,是一种新型的含氯消毒洗涤剂,为广谱、高效、快速的杀菌剂,可用于医疗器械及各种用具如茶具、餐具、食品、厨房用品、地面、家具等的消毒。注意本品不宜在高温和强光下存放。氯胺又名氯亚明,含有效氯12%, 杀菌作用缓和、持久,可用于皮肤、粘膜、食具、器皿的消毒。 6.其他 醛类如甲醛、戊二醛;酸类如过氧乙酸;含碘消毒剂如碘伏、碘酊等;染料类如甲紫等。可根据具体情况选择应用。 四、无菌操作法 无菌操作法系指整个操作过程控制在无菌条件下进行的一种操作方法。对于不能用加热灭菌或其他方法灭菌的无菌制剂的制备,如一些不耐热的药物,需要制成注射剂、眼用溶液、眼用软膏、皮试液等,均需采用无菌操作法。无菌操作必须在无菌操作室或无菌操作柜内进行,目前无菌操作室(柜)多采用层流洁净技术,确保无菌环境,所用的一切用具、材料以及环境应严格灭菌,操作人员的卫生应严格按照 GMP的有关规定执行。按无菌操作制备的产品,最后一般不再灭菌,直接使用,故无菌操作法对保证不耐热产品的质量至关重要。无菌操作室的灭菌是关键。 (一)无菌操作室的灭菌 无菌操作室的空气应定期进行灭菌,常用甲醛、丙二醇或乳酸等蒸汽熏蒸。室内的用具、地面、墙壁等用甲酚、来苏儿、新洁尔灭等消毒剂喷洒或擦拭。其他用具尽量用热压灭菌法或干热灭菌法处理。每天工作前开启紫外灯 1小时,以保证操作环境的无菌状态。 (二)无菌操作 操作人员进入无菌操作室前要按规定沐浴风淋,并换上无菌的工作衣、帽、口罩和鞋,内衣与头发不得暴露,双手应按规定洗净并消毒后方可进行操作,以免造成污染。操作过程中所用的容器、用具、器械均要经过灭菌,大量无菌制剂的生产应在无菌洁净室内进行,小量无菌制剂的制备可在层流洁净工作台上进行。 (三)无菌检查法 制剂经无菌操作法处理后,须经无菌检查法验证已无微生物存在,才能使用。 1.无菌检查法 法定的无菌检查法,包括直接接种法和薄膜滤过法,可按现行版《中国药典》一部通则中的无菌检查法项下的具体规定和方法检查。薄膜滤过法用于无菌检查的突出优点,在于可滤过较大量的样品,滤过后的薄膜,即可直接接种于培养基中,也可直接用显微镜观察检验。故此法灵敏度高,操作简单,并不易产生假阳性结果。无菌检查法应在层流洁净工作台上操作。 2.中成药的微生物学检查与活螨检查 为确保中成药的质量,根据规定,中成药的微生物学检查应包括以下项目: 1细菌总数的测定;2霉菌总数的测定;3大肠杆菌的检验4沙门菌、痢疾杆菌的检验;5铜绿假单胞菌的检验;6金黄色葡萄球菌的检验;7厌氧菌的检验;8活螨的检验。 以上项目的检验方法和具体判定标准,按《中国药典》和《药品卫生检验方法》等执行。